免疫组化（IHC）实验是一项用于探测组织或细胞中特定抗原位置、类型及数量的关键技术。其实验流程涉及多个步骤，从样本准备到显微镜观察，确保实验结果的可靠性。以下是简明的IHC实验流程：

1. 样本固定

金年会金字招牌至上网站认为，固定样本的目的是保持组织的形态与结构，防止细胞自溶，并保留抗原性。操作时，可使用10%中性甲醛溶液（NBF）进行固定，推荐时间为18-24小时，以保证组织被完全浸没并避免损伤。固定完成后，将组织切割成15×15×0.5cm³的块，以便后续处理。

2. 包埋

为了方便切片，组织需嵌入石蜡中。此步采用梯度酒精（75%、85%、95%、100%），每次处理1小时进行脱水。随后，利用二甲苯作为透明剂，使组织透明，再将其浸入熔融石蜡中冷却至固化。

3. 切片

将包埋的组织切成薄片，厚度维持在3-5μm。切割时，需要适当控制切片机的刀片速度与锋利度，切片后应贴附在载玻片上，并在温水中平展，避免折叠问题。

4. 脱蜡与水化

此步骤的目的是去除石蜡，使切片恢复到水分状态。将切片置于60°C的烤箱中烘烤30-60分钟，并依次用二甲苯和梯度酒精（100%、95%、85%、75%）进行脱蜡与水化，最后用PBS缓冲液洗涤三次。

5. 抗原修复

通过抗原修复，再次恢复被固定剂遮蔽的抗原表位，增强抗体结合能力。可使用柠檬酸钠缓冲液（pH 6.0）或EDTA缓冲液（pH 9.0）进行热修复，采用高压蒸汽修复（120°C，20分钟）或微波修复（37°C，10-30分钟）。修复后，同样需用PBS洗涤三次。

6. 封闭非特异性结合

封闭步骤旨在阻止抗体与非特异性蛋白结合，降低背景染色。可使用山羊血清或其他封闭剂覆盖切片，持续15-30分钟后，用PBS洗涤三次。

7. 一抗孵育

在此步骤中，目的为一抗与目标抗原结合。根据抗体说明书稀释一抗后，滴加于切片上，孵育条件可选择4°C过夜或37°C 1-2小时，最后用PBS洗涤三次。

8. 二抗孵育

二抗会与一抗结合，形成复合物。滴加二抗工作液并孵育30-60分钟后，再次用PBS洗涤三次。

9. 显色

通过底物的显色反应，以检测抗原-抗体复合物的存在。通常可使用DAB显色液（含H2O2）在室温下进行显色反应，持续1-5分钟后，用去离子水终止反应。

10. 复染

复染步骤用于增强对比度，便于观察细胞结构。采用苏木素染色，染色1-2分钟后，用盐酸酒精进行分化，最后以去离子水冲洗。

11. 脱水与封片

此步为了去除切片中的水分，便于保存和观察。依次用梯度酒精（75%、95%、100%）脱水，最后用二甲苯处理。滴加中性树胶封片后，加盖盖玻片，确保去除气泡。

12. 结果观察

最后在显微镜下观察染色结果，判断抗原的存在和分布情况。使用光学显微镜观察切片，并记录染色结果，可以借助图像分析软件（如ImageProPlus）进行半定量分析。

注意事项

为确保实验结果的准确性，金年会金字招牌至上网站建议设置阳性与阴性对照。试剂需严格按照说明书配置，确保浓度和pH值的准确。同时，保持实验环境清洁以避免交叉污染，并且在抗原修复和显色步骤中注意温度控制，以保证实验的有效性。